Rudolf van Anhalt-Zerbst (Zerbst, 1621-1667) was de enige zoon van Rudolf van Anhalt-Zerbst en Magdalena van Oldenburg. Hij volgde zijn vader op als vorst van Anhalt-Zerbst bij diens dood in 1650. Na zijn aantreden hervormde Johan snel zijn vorstendom in lutherse zin. Hij was gehuwd met Sophia Augusta van Holstein-Gottorp (1630-1680), dochter van hertog Frederik III van Holstein-Gottorp, en was vader van:
- Johan Frederik (1650-1651)
- George (1651-1652)
- Karel Willem (1652-1718)
- Anton (1653-1714), gehuwd met Augusta van Biberstein (1659-1736)
- Johan Adolf (1654-1726)
- Johan Lodewijk I (1656-1704), gehuwd met Christina van Zeutsch (1666-1669)
- Joachim Ernst (1657-1658)
- Magdalena (1658-1659)
- Frederik (1660-1660)
- Hedwig (1662-1662)
- Sophia Augusta (1663-1694), gehuwd met hertog Johan Ernst III van Saksen-Weimar (1664-1707)
- August (1666-1667).