Dosage colorimétrique
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Un dosage colorimétrique est possible lorsque qu'une réaction chimique donne des produits colorés et si l'intensité de la coloration est proportionelle à la concentration de l'élément à doser. Les dosage colorimétriques s'appuie sur la loi de Beer-Lambert.
Sommaire |
[modifier] Loi de Beer-lambert
La forme utilisé est la suivante : A = ε × l × C
- A : absorbance de la solution sans unité
- ε : coefficient d'extinction molaire en L×mol-1×cm-1 (parfois noté avec un ξ)
- l : longueur de cuve traversée par la lumiere en cm
- C : concentration molaire en mol/L
La mesure de l'absorbance est donnée par un spectrophotomètre qui mesure la densité optique. Plus une solution est colorée, plus la lumière a du mal à traverser , donc plus l'absorbance de la solution augemente.
[modifier] Protocole général des dosages colorimétriques
[modifier] Conditions générales de réalisation
Pour réaliser un dosage colorimétrique, certaines conditions doivent être remplies :
- la réaction doit donner une coloration proportionnele à la concentration
- la coloration doit être stable le temps de faire les mesures
- le composé à analyser doit être dans des concentrations très faibles
- la gamme étalon doit être réalisée dans les mêmes conditions physico-chimique que les essais
- la longueurs d'onde du spectrophotomètre doit être celle qui permet la plus forte absorbance possible
si ces premières conditions sont remplies, un dossage colorimétrique peut être possible.
[modifier] Réalisation d'une gamme d'étalonage
Pour régler le spectrophotomètre, la réalisation d'une gamme d'étalonnage est indispensable (sauf pour les kits vendu dans le commerce). La gamme d'étalonage permet de déterminer une absorbance à une longueur d'onde donnée pour une concentration en composé recherché. Il faut donc préparer une solution de l'élément à doser de faible concentration. Lors de la réalisation de la gamme, le volume de solution doit être identique dans tout les tubes. Or les volumes de réactifs doivent rester constants pour permettre la réaction et les quantités de composé à doser doivent varier dans chaque tube. Il faudra donc compléter avec de l'eau distillée à un même volume pour que les tubes soit au même niveau de solution. Un tube 0 ou blanc doit impérativement être réalisé pour annuler l'absorbance due aux réactifs eux-mêmes. Ce tube ne contient pas de composé à doser La réalisation des gammes d'étalonage demande beaucoup de précision, et doit être de préférence, réalisée dans les mêmes conditions que les essais
[modifier] Réalisation d'un tableau colorimétrique
Pour vous aidez, la réalisation d'un tableau colorimétrique permet d'éviter des erreur lors de la réalisation de protocole fastidieux et de noter vos résultats. Voici en exemple le tableau colorimétrique du Dosage du glucose par le DNS.
| Tubes | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | x1 | x2 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| solution de glucose a 0.01 mol/l en ml | 0 | 0,3 | 0,6 | 0,9 | 1,2 | 1,5 | 0 | 0 |
| eau en ml | 18 | 17,7 | 17,4 | 17,1 | 16,8 | 16,5 | 17,5 | 17 |
| DNS en ml | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 |
| Essais en ml | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0,5 | 1 |
| Absorbance a 350 nm | 0 | 0,205 | 0,494 | 0,748 | 1,022 | 1,280 | 0,668 | 1,340 |
| Quantité de matiere en µmol | 0 | 3 | 6 | 9 | 12 | 15 | 7.94 | ? |
[modifier] Lecture des résultats
Lors de l'obtention des valeurs d'absorbances, il faut tracer la droite d'absorption en fonction des quantités de composé par tubes.
Elle doit passer par l'origine du repère et par toutes les valeurs si le dosage a bien été réalisé. Reportez à cette droite les valeurs d'absorbance de vos essais pour en déterminer la quantité de composé présent. Pour remonter à la concentration en composé présent dans le produit, n'oubliez pas les dilutions possibles ou les quantités de matière qui ont été utilisées.
[modifier] Voir aussi
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