Bromuro de Etidio
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El Bromuro de Etidio (EtBr) es un agente intercalante usado comúnmente como marcador de ácidos nucleicos en laboratorios de biología molecular para procesos como la electroforesis en gel de agarosa. Cuando se expone esta sustancia a luz ultravioleta, emite una luz roja-anaranjada, que se intensifica unas 20 veces después de haberse unido a una cadena de ADN. Este efecto es debido al aumento de la hidrofobia del medio, y no a la rigidificación del anillo bencénico, no estando éste entre pares de bases del ADN. Como el Bromuro de Etidio se intercala en el ADN, esta sustancia tiene un poderoso efecto mutágeno y, posiblemente puede ser cancerígeno o teratógeno.
El Bromuro de Etidio tiene una referencia CAS 1239-45-8, y una fórmula C21H20BrN3. Como la mayoría de los compuestos fluorescentes, es una sustancia aromática. La mayor parte de la molécula es una estructura tricíclica con grupos amino-benceno en cada lado de una molécula piridínica(seis átomos, conteniendo Nitrógeno y un anillo aromático). Esta estructura dibenzopiridínica es conocida con el nombre de fenantridina.
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[editar] Peligros
El Bromuro de Etidio es una sustancia fuertemente mutagénica y es irritante a los ojos, piel, mucosas y el tracto respiratorio. Los efectos sanitarios de la exposición a este compuesto no han sido todavía investigados profundamente. Se sospecha que puede ser cancerígeno y teratogénico por su cualidad de mutagenicidad, aunque no hay ninguna prueba concluyente de ninguno de estos efectos. Si se ingiere, se inhala o se absorbe por la piel, esta sustancia puede tener efectos nocivos.
[editar] Manipulación
En la preparación de disoluciones y en cualquier otra operación que pueda crear polvo de Bromuro de Etidio o aerosoles deben ser realizadas en una campana de gases para prevenir la inhalación de esta sustancia. Se deben usar guantes en todo momento. Los guantes de látex no ofrecen una buena protección frente al Bromuro de Etidio. Los guantes de goma de nitrilo son mucho más efectivos en este caso. Cuando se debe trabajar con grandes concentraciones o por un periodo de tiempo elevado, la posibilidad de usar un guante doble puede reducir el riesgo de exposición, especialmente si el guante exterior se cambia cuando ha sido contaminado significativamente.
[editar] Derrames o exposición personal
Como con cualquier otra sustancia, si se derrama sobre los ojos o la piel, lavar abundantemente con agua durante 15 minutos usando una ducha de seguridad o un lavaojos. Si se inhala o se ingiere se debe buscar ayuda médica urgentemente. Para derrames, use un absorbente para secar el Bromuro de Etidio. Limpiar también cualquier traza de esta sustancia en estado sólido con mucha precaución e intentando no crear polvo. Elimínese la sustancia en un contenedor hermético y tírese dentro de un cubo etiquetado.
[editar] Eliminación de residuos
[editar] Geles de electroforesis
Las trazas de Bromuro de Etidio en geles de electroforesis no deberían ser un peligro. En caso de que la concentración sea mayor estos geles no deben ser desechados en el cubo de residuos del laboratorio. EHS recomienda lo siguiente:
- Menos de 0.1% de Bromuro de Etidio: Tirar al cubo de basura del laboratorio.
- Mayor o igual a 0.1%: Tirar en un cubo especial para proceder a su incineración.
[editar] Disoluciones de Bromuro de Etidio
Las disoluciones que contienen esta sustancia deben ser desactivadas, neutralizadas y desechadas a través de la pila acompañándose de grandes cantidades de agua. Se puede comprobar el éxito del proceso de desactivación usando luz ultravioleta para detector la fluorescencia. Hay tres métodos de desactivar estas disoluciones
[editar] Método de Armour
Es el método más simple, pero es controvertido, ya que un estudio encontró trazas de mezclas reactivas mutagénicas después de usar el método. (Lunn, G. and E. Sansone, Analytical Biochemistry, vol. 162, pp. 453-458, 1987)
- Mezclar cantidades iguales de Bromuro de Etidio y hipoclorito de sodio (lejía).
- Agitar constantemente durante 4 horas y dejar reposar 2-3 días.
- Ajustar el pH a 4-9 con hidróxido sódico.
- Desechar por la pila con grandes cantidades de agua.
[editar] Método de Lunn y Sansone
Para cada 100 ml de disolución de Bromuro de Etidio:
- Añadir 5% de ácido hipofosforoso.
- Añadir 12 ml de nitrato sódico 0,5 M.
- Agitar fuertemente y dejar reposar durante 20 horas.
- Ajustar el pH a 4-9 usando hidróxido sódico.
- Desechar por la pila con grandes cantidades de agua.
[editar] Método de Quillardet y Hoffnung
Este método usa permanganate de potasio 0,5 M y ácido clorhídrico 2,5 M. EHS no recomienda este método debido a la abundante concentración de cloro que puede desprenderse si se usa este método.
[editar] Filtro de Carbono
Filtrar las disoluciones de Bromuro de Etidio, sin otras sustancias, a través de un filtro de Carbono activado es una forma relativamente simple y efectivo para eliminar el Bromuro de Etidio.
- Filtrar la disolución de Bromuro de Etidio a través del filtro de carbono activado.
- Deséchese el filtrado por la pila con abundante agua.
- Introdúzcase el filtro de carbón activado en una bolsa sellada (Zip-Loc) y tírese en el cubo de contaminantes biológicos para que se proceda a la posterior incineración.
También puede usarse como elemento filtrante carbón vegetal, prestando especial atención en la confección para que efectivamente el líquido atraviese el carbón. Luego se desecha el carbón en bolsa de plástico de buen grosor y perfectamente cerradas para su posterior incineración. Con el líquido filtrado es conveniente antes de desecharlo realizarle alguno de los tratamientos descriptos arriba.
Otra posibilidad es: a los desechos líquidos con bromuro de etidio colocarlos en un recipiente para su desecho (ej. bidon) y agregarle carbon vegetal, para que en caso de rotura del bidon o resipiente no se produsacan derrames líquidos. Luego al bidon con el carbon que a absorbido la solución de bromuro de etidio se envía al incinerador. Este medio es recomendable cuando se almacena por tiempo prolongado los residuos.
Guantes, Equipamientos y otros materiales:
Los guantes, tubos de ensayo, papeles de laboratorio, etc. que estén contaminados por Bromuro de Etidio deben desecharse en el cubo de los contaminantes biológicos para poder incinerarlos correctamente. Considérese la posibilidad de desactivar el Bromuro de Etidio con lejía si están muy contaminados.
[editar] Otros nombres del Bromuro de Etidio
- Bromuro de 2,7-diamino-10-etil-6-fenilfenantridinio
- Bromuro de 2,7-diamino-10-etil-9-fenilfenantridinio
- Bromuro de 3,8-diamino-1-etil-6-fenilfenantridinio
- Bromuro de 3,8-diamino-5-etil-6-fenilfenantridinio
- Bromuro de Homidio
